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摘要：目的观察血管紧张素1-7[Ang(1-7)]对氯化钴(cobaltouschloride，CoCl_2·6H_2O，Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化的影响并探讨其可能的机制。策略：体外传代培养NRK52E细胞，按2×10~5/ml浓度接种于六孔板中，并随机分为对照组、Co组、Ang-(1-7)、Co+Ang-(1-7)组四组，Ang-(1-7)终浓度均为10-6mol/L，Co终浓度为10~(-4)mol/L。①对照组：NRK52E培养液培养细胞，无任何干预因素，②Co组：NRK52E培养液中加入氯化钴，③Ang-(1-7)组：NRK52E培养液中加入血管紧张素-(1-7)，④Co~+Ang-(1-7)组：NRK52E培养液在氯化钴基础上加入血管紧张素-(1-7)。每组分别在试验第1天，3天，6天观察细胞爬片，进行如下检测：（1）采取免疫细胞化学SABC染色法观察各组细胞α-A、低氧诱导因子-lα(hypoxiainduciblefoctor-lα，HIF-lα)、p-ERK1/2的表达；（2）酶联免疫吸附法检测细胞上清液中胶原Ⅰ（ColⅠ）的含量；（3）Westernblotting蛋白印迹法检测测定p-ERK1/2蛋白表达水平的表达。结果：（1）免疫细胞化学检测结果：①α-A在各组的表达：培养1天，3天，6天后，对照组未见染色阳性细胞，Ang-(1-7)组与对照组类似；Co组细胞随培养时间延长α-A表达也增加，但1天，3天与同时间点对照组比较，均无统计学作用；6天时Co组表达α-A显著高于对照组（P0.05）；与同时间点Co组相比，Co+Ang-(1-7)组细胞α-A表达显著降低（P0.05）；培养细胞1天，3天时，四组细胞α-A变化无统计学作用，（HIF-lα、ColⅠ、p-ERK1/2与此相同）故后续探讨细胞培养时间均为6d；②各组HIF-lα表达的变化：培养6天后，对照组未见染色阳性的细胞，Ang-(1-7)组与对照组类似；Co组细胞HIF-lα表达较对照组显著增加（P0.05），Co+Ang-(1-7)组与同时间点Co组比较，细胞HIF-lα表达显著减少（P0.05）；③肾小管上皮细胞p-ERK1/2表达的变化：培养6天后，对照组几无p-ERK1/2阳性表达的细胞，Ang-(1-7)组与之类似；Co组细胞p-ERK1/2表达较对照组显著增加（P0.05），Co+Ang-(1-7)组与同时间点Co组比较，细胞p-ERK1/2表达显著减少（P0.05）；（2）ELISA检测结果：培养6天后，Ang-(1-7)组与对照组比较，细胞上清液中ColⅠ的含量无显著转变，Co组与对照组比较，细胞上清液中ColⅠ含量显著升高（P0.05）；与Co组比较，Co+Ang-(1-7)组细胞上清液中ColⅠ含量显著减少（P0.05）。（3）Westernblot蛋白印迹检测结果：细胞培养6天后，与对照组比较，Ang-(1-7)组p-ERK1/2的表达无显著转变，Co组p-ERK1/2表达显著增强（P0.05），与Co组比较，Co+Ang-(1-7)组p-ERK1/2的表达显著减弱（P0.05）。结论：(1)Ang-(1-7)能抑制Co诱导的NRK52E细胞向肌成纤维细胞的表型转化；(2)Ang-(1-7)能减少Co诱导的NRK52E细胞转分化后细胞外基质Ⅰ型胶原的分泌。(3)其作用可能是通过pERK1/2信号通路实现。关键词：低氧论文血管紧张素-(1-7)论文肾小管上皮细胞转分化论文低氧诱导因子-lα论文
摘要4-6
Abstract6-9
前言9-13
材料与策略13-25
结果25-30
讨论30-39
结论39-40