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摘要：第一部分钛基关节检测体阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层的制备及表征目的：利用过滤阴极弧沉积技术制备的涂层具有结合力强的特性，采取该策略在钛基检测体表面沉积含有硅元素的二氧化钛涂层及不含硅的单纯二氧化钛涂层，制备二氧化钛掺硅涂层及二氧化钛涂层，并检测其表征。策略：将硅片和钛片作为阴极等离子源，共沉积于钛基关节检测体表面，制备含有硅元素的二氧化钛涂层，将该涂层与以双钛片为阴极源沉积的纯二氧化钛涂层进行对照探讨。以扫描电镜观察两种涂层的表面形貌，X射线光电子能谱仪测定两组涂层的元素组成，X射线衍射仪测定两组涂层的相组成，自动化接触角测量仪测量两组涂层表面的水接触角、对两组涂层的可湿性进行浅析，并检测两组涂层的表面能。结果：X射线光电子能谱浅析显示，阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层中含有4.6%的硅元素；X射线衍射结果显示这两种涂层可能是无定形态，钛基质峰显示清晰；扫描电镜结果显示已掺入的硅元素未显著转变涂层的表面形貌。二氧化钛掺硅涂层及二氧化钛涂层接触角分别为83±0.74°、94±0.78°，二氧化钛掺硅涂层的亲水性改善。二氧化钛涂层的表面能显著低于二氧化钛掺硅涂层组。结论：掺硅未显著转变过滤阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层的表面形貌，但涂层的化学组成发生转变，改善了涂层的亲水性，增加了涂层的表面能；结合力强的阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层若具有良好的细胞生物活性，将为未来植入物表面改性提供新的选择，该新型植入物涂层值得进一步探讨。第二部分钛基关节检测体阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层对成骨细胞粘附活性的影响目的：探讨阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层对成骨细胞MG63粘附活性的影响。策略：以二氧化钛掺硅涂层作为实验组，单纯二氧化钛涂层作为对照组，以相同的密度在两组涂层表面分别种植MG63细胞。采取细胞计数CCK8法分别在1、4、12、24小时检测粘附于两组涂层表面的细胞数目；扫描电镜于第4、12、24小时观察成骨细胞在两组材料表面的铺展情况；培养2、12小时，进行细胞肌动蛋白张力纤维、细胞核两重荧光染色，培养12、24小时，进行粘着斑蛋白、肌动蛋白张力纤维、细胞核三重荧光染色，观察两组涂层表面细胞局部粘着斑及细胞骨架的分布形态。结果：MG63细胞在两组涂层表面培养1、4小时，CCK8检测结果显示粘附在两组涂层表面的细胞数未见显著差别(P0.05)；当培养时间延长至12、24小时，CCK8检测结果显示粘附于二氧化钛掺硅涂层表面的细胞数量较二氧化钛涂层表面的细胞数量显著增加(P 0.05)；培养2小时，两组涂层表面细胞肌动蛋白张力纤维荧光染色形态相似，当培养时间延长到12、24小时，Si-TiO2涂层表面MG63细胞肌动蛋白和粘着斑蛋白的分布、表达较二氧化钛涂层组增强；培养4小时，电镜观察两组涂层表面细胞形态未见差别；培养12小时，MG63细胞在二氧化钛掺硅涂层表面伪足生长较二氧化钛涂层表面细胞伪足更长、更密；培养24小时，二氧化钛掺硅涂层表面细胞覆盖面积较二氧化钛掺硅涂层表面细胞覆盖面积显著增加(P 0.05)。结论：在阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层表面培养的MG63细胞肌动蛋白张力纤维和粘着斑蛋白显著增强，这推动了细胞骨架重构及局部焦点粘附的形成，钛基关节检测体阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层可以有效推动成骨细胞MG63的粘附。第三部分钛基关节检测体阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层对成骨细胞增殖、凋亡的影响目的：探讨阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层对成骨细胞MG63增殖、凋亡的影响。策略：以二氧化钛掺硅涂层作为实验组，单纯二氧化钛涂层作为对照组，分别以相同的密度种植MG63细胞进行培养。细胞培养1、5天后，利用场发射电镜分别观察两组涂层表面细胞的生长情况；流式细胞仪浅析细胞在两组涂层表面生长1、5天后的细胞存活和凋亡百分比。培养1、3、5天，采取细胞计数CCK8法分别检测两组涂层表面MG63细胞增殖数量。结果：电镜观察结果表明，培养1、5天，二氧化钛掺硅涂层表面细胞增殖数量较单纯二氧化钛涂层显著增加。流式细胞术浅析结果显示：培养1、5天，在两组涂层表面培养的MG63细胞存活和凋亡比例未见显著差别(P0.05)。CCK8检测结果表明，细胞培养1、3、5天，二氧化钛掺硅涂层表面MG63细胞增殖数显著多于单纯二氧化钛涂层表面细胞增殖数(P 0.05)。结论：阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层表面培养的成骨细胞MG63增殖数目较二氧化钛涂层表面细胞数目显著增加，显示二氧化钛掺硅涂层能够有效推动细胞在其表面增殖，而二氧化钛掺硅涂层与单纯二氧化钛涂层对于在其表面培养的成骨细胞MG63的凋亡未见显著差别，表明阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层是一种细胞生物活性良好的涂层材料。第四部分钛基关节检测体阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层对成骨细胞分化活性的影响目的：探讨阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层对成骨细胞MG63分化活力的影响。策略：以二氧化钛掺硅涂层作为实验组，单纯二氧化钛涂层作为对照组，表面种植相同密度的MG63细胞进行培养。分别于第1、3、5天三个时间点收集标本，检测两组涂层表面MG63细胞碱性磷酸酶活性。MG63细胞在两组涂层表面分别培养3、5天，收集标本进行细胞I型胶原荧光染色，荧光显微镜观察两组涂层表面成骨细胞MG63的分化标志物I型胶原的表达。细胞在两组涂层表面培养1、3、5天三个时间点收集标本，采取实时定量RT-PCR法检测两组涂层表面MG63细胞I型胶原及骨钙素的基因表达；采取Western blot法检测两组涂层表面MG63细胞I型胶原的蛋白表达。结果：检测结果显示两组涂层表面MG63细胞碱性磷酸酶活性随培养时间的增加均逐渐增高。在培养1天时，两组涂层表面细胞碱性磷酸酶活性无显著差别(P0.05)，但在培养时间延长至第3、5天时二氧化钛掺硅涂层表面细胞的碱性磷酸酶活性显著高于单纯二氧化钛涂层组(P 0.05)。荧光显微镜观察，在两组涂层表面细胞培养至第3、5天时I型胶原染色结果显示，二氧化钛掺硅涂层表面MG63细胞I型胶原表达丰富，分布广泛，而单纯二氧化钛涂层表面MG63细胞I型胶原表达量少且稀疏。实时定量RT-PCR检测结果显示，二氧化钛掺硅涂层表面MG63细胞I型胶原及骨钙素基因表达在培养第1天时与对照组无显著差别(P0.05)，但在培养第3、5天时二氧化钛掺硅涂层表面MG63细胞I型胶原及骨钙素基因表达显著高于单纯二氧化钛涂层组(P 0.05)；Western blot检测结果显示两组涂层表面MG63细胞I型胶原蛋白表达在培养第1天时，两组之间无显著差别(P0.05)，但培养至第3、5天时，二氧化钛掺硅涂层表面MG63细胞I型胶原蛋白表达量显著较单纯二氧化钛涂层组增高(P 0.05)。结论：与阴极弧沉积二氧化钛涂层相比，二氧化钛掺硅涂层通过增加碱性磷酸酶活性，上调骨钙素基因、Ⅰ型胶原纤维基因和蛋白表达推动MG63细胞分化，表明阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层是一种生物活性良好的涂层材料。第五部分钛基关节检测体阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层推动成骨细胞粘附活性的信号转导通道目的：探讨阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层对成骨细胞MG63粘附活性影响的可能信号转导通道。策略：以二氧化钛掺硅涂层作为实验组，单纯二氧化钛涂层作为对照组，表面种植相同密度的MG63细胞进行培养。分别于细胞培养后第1、4、12、24小时四个时间点收集标本，采取实时定量RT-PCR法检测两组涂层表面MG63细胞整合素β1、粘着斑激酶基因表达；细胞培养后于第4、12、24小时三个时间点收集标本，Western blot法检测两组涂层表面MG63细胞粘着斑激酶、粘着斑激酶磷酸化蛋白表达。结果：实时定量RT-PCR法检测显示，细胞培养1、4小时，两组涂层表面MG63细胞整合素β1基因表达无统计学差别(P0.05)，细胞培养12、24小时，二氧化钛掺硅涂层表面MG63细胞整合素β1基因表达显著高于单纯二氧化钛涂层组(P 0.05)；细胞培养1小时，两组涂层表面MG63细胞粘着斑激酶基因表达无统计学差别(P0.05)，细胞培养4、12、24小时，二氧化钛掺硅涂层表面MG63细胞粘着斑激酶基因表达显著高于单纯二氧化钛涂层组(P 0.05)；细胞培养4小时，Western blot法检测显示两组涂层表面MG63细胞粘着斑激酶、粘着斑激酶磷酸化蛋白表达无统计学差别(P0.05)，细胞培养时间延长至12、24小时，二氧化钛掺硅涂层表面MG63细胞粘着斑激酶、粘着斑激酶磷酸化蛋白表达显著高于单纯二氧化钛涂层组(P 0.05)。结论：阴极弧沉积二氧化钛掺硅涂层与单纯二氧化钛涂层相比能推动MG63粘附活性，二氧化钛掺硅涂层对细胞骨架和粘着斑的调节可能受整合素途径和粘着斑激酶磷酸化的介导，并通过整合素β1-粘着斑激酶信号转导途径影响MG63细胞的粘附活性。关键词：阴极弧沉积论文硅元素论文二氧化钛论文表征论文阴极弧沉积论文硅元素论文二氧化钛论文成骨细胞论文粘附论文阴极弧沉积论文硅元素论文二氧化钛论文成骨细胞论文增殖论文凋亡论文阴极弧沉积论文硅元素论文二氧化钛论文成骨细胞论文分化论文阴极弧沉积论文硅元素论文二氧化钛论文成骨细胞论文粘附论文信号转导论文
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