本站原创
摘要：目的：探讨自噬抑制剂（Cathepsin B Inhibitor，CBI）对三氟所致新生期反复惊厥大鼠远期神经行为和海马苔藓纤维再生性发芽的影响及分子机制。策略：88只生后6d（用P6表示，下同）的健康Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为四组(n=22/组)：正常对照组、CBI空白对照组、惊厥组及CBI组。通过三氟反复吸入建立新生期大鼠反复惊厥（Recurrent neonatal seizures，RS）动物模型：惊厥组（Recurrent Seizures,RS组）每日吸入三氟诱导惊厥发作5次，每次间隔30min，连续9d；正常对照组(Contrast,CONT组)与RS组同样操作但不吸入三氟；CBI组于惊厥前腹腔注射CBI（2μl,0.5g·L-1），同样策略吸入三氟诱导惊厥发作，操作同RS组; CBI空白对照组（用CCBI组表示），与CBI组同样操作但不吸入三氟。之后分别于生后不同时间段观察大鼠体质量变化，耳廓分离，门齿萌出数目等评价其发育情况；并于一月龄时采取Morris水迷宫以及旷场行为试验，检测大鼠的学习记忆功能及认知情感能力。于生后35d将四组大鼠大脑标本取出，采取Neo-Timm’s染色法观测海马苔藓纤维发芽的程度及分布情况。并同时将各组大鼠分别取大脑海马及皮层组织，采取免疫印迹技术检测锌转运体3（Zn~（2+）transporter3,ZnT3）及丛生蛋白Clusterin的表达。结果：1、行为学结果：（1）体质量增加10d-14d RS组显著低于CONT组与CBI组，差别具有显著性（P＜0.01）。（2）旷场实验：RS组和CBI组水平运动次数少于CONT组（P＜0.05），RS组垂直运动少于CONT组，有显著差别（P＜0.05）。（3）Morris水迷宫检测：〈1〉四组逃避潜伏期于测试第1d至第5d有逐渐缩短走势，第5d RS组逃避潜伏期显著长于对照组（P＜0.01），第2d,5d CBI组显著短于RS组（P＜0.05）；〈2〉RS组搜寻对策较CONT组和CBI组体现较差（P＜0.05）；〈3〉四组穿越平台次数无显著差别（P＞0.05）。2、Neo-Timm’s染色结果显示：RS组CA3区和齿状回苔藓纤维发芽程度显著高于CONT组和CBI组（P﹤0.01），CBI组CA3区苔藓纤维发芽程度显著高于CONT组（P﹤0.01）。CONT组和CCBI组Timm’s颗粒分布无显著差别（P﹥0.05）。3、免疫印迹法显示：（1）RS组在P35海马和皮质中ZnT3的表达显著高于CONT组和CBI组（P＜0.05），CBI组与CONT组相比无显著差别（P＞0.05），CONT组与CCBI组相比无显著差别（P＞0.05）。（2）RS组在P35海马和皮质中Clusterin蛋白的表达显著高于CONT组和CBI组（P＜0.05），CBI组与CONT组相比无显著差别（P＞0.05），CONT组与CCBI组相比无显著差别（P＞0.05）。结论：1、三氟诱导新生期反复惊厥导致生长发育、神经行为及学习能力损伤，同时造成齿状回及CA3区苔藓纤维异常发芽增强，并使大脑皮质及海马ZnT3、Clusterin蛋白表达增高。2、惊厥发作前运用CBI进行干预，能改善惊厥所致生长发育、情感认知等神经行为损伤。3、惊厥发作前运用CBI进行干预，显著抑制反复惊厥所致海马齿状回及CA3区苔藓纤维发芽程度，并可下调远期海马及大脑皮层ZnT3、Clusterin蛋白的表达。4、本探讨表明，CBI可通过ZnT3/Clusterin途径对新生期惊厥性脑损伤发挥神经保护作用。关键词：惊厥论文新生期论文CBI论文行为论文ZnT3论文Clusterin论文苔藓纤维发芽论文
中文摘要4-6
Abstract6-9
引言9-11
实验流程图11-12
第一部分 CBI 对新生期反复惊厥大鼠神经行为转变的影响12-26
材料与策略12-16
结果16-25
小结25-26
第二部分 CBI 对新生期反复惊厥大鼠远期基因表达的干预作用26-38
第一节 Neo-Timm’s 染色的观察探讨26-29
材料与策略26-27
结果27-29
第二节 ZnT3 和 Clusterin 的表达探讨29-37
材料与策略29-34
结果34-37
小结37-38
附图38-43
讨论43-49
结论49-50