本站原创摘要6-7
ABSTRACT7-10
第一章 综述10-16
第一节 Akt的概述10-12
1.1 PI3K-Akt信号通路10-11
1.2 Akt的结构及其生化特性11
1.3 Akt的生物学功能11
1.4 Akt与癌症的联系11-12
第二节 SUMO化修饰及其功能的概述12-15
2.1 SUMO分子的发现及其结构12-13
2.2 SUMO化修饰历程及其酶13-15
2.3 SUMO化修饰的生物学功能15
第三节 本探讨的论述依据与作用15-16
第二章 材料与策略16-28
第一节 实验材料16-18
1.1 细胞16
1.2 细胞培养用试剂16
1.3 主要试剂16-18
第二节 实验策略18-28
2.1 Akt1蛋白质序列的生物信息学浅析18
2.2 实验所需各类质粒的获得18-19
2.3 实验所需表达载体的构建19-21
2.4 细胞培养与转染21-22
2.5 体内SUMO实验22
2.6 体外SUMO实验22-23
2.7 免疫荧光染色实验23-24
2.8 免疫印迹实验(Western Blot)24-26
2.9 免疫共沉淀实验(Co-IP)26
2.10 BIFC26-27
2.11 核质分离27-28
第三章 结果与浅析28-42
第一节 Akt1能发生SUMO化修饰28-30
1.1 Akt1在体内的SUMO化修饰28
1.2 Akt1的体外SUMO化修饰28-29
1.3 内源Akt的SUMO化修饰29-30
1.4 Akt1的突变体能发生SUMO化修饰30
第二节 PIAS1是Akt1SUMO化修饰的E3连接酶30-32
2.1 PIAS1能够推动体内的Akt1SUMO化修饰30-31
2.2 细胞内Akt1与PIAS1的相互作用31-32
2.3 细胞内Akt1的缺失突变体与PIAS1的相互作用32
第三节 SENP1能使Akt1去SUMO化修饰32-34
第四节 Akt的SUMO化修饰发生在细胞核内34-36
4.1 BIFC34-35
4.2 NES-Akt,NLS-Akt的定位35
4.3 核质分离35-36
第五节 Akt1的SUMO化修饰位点36-40
5.1 Akt1缺失突变体都能发生SUMO化修饰36-37
5.2 Akt1的SUMO化修饰位点的预测37-38
5.3 K276R是Akt1发生SUMO化修饰的主要位点38-40
第六节 SUMO化修饰对Akt1的细胞生物学功能的影响40-42
6-1 Akt1的SUMO化修饰可能影响Akt1在细胞内的定位40-41
6-2 Akt1的SUMO化修饰可能影响Akt1的活性41-42
第四章 讨论与展望42-44
附录44-51