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小体免疫磁珠制备与对植物油中黄曲霉毒素B_1检测

收藏本文 2024-02-26 点赞:7728 浏览:24896 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:植物油脂是人类生活的必需品。我国作为植物油脂消费大国,植物油安全对保障人民健康、推动贸易增加以及维护社会和谐进展具有重要作用。植物油脂原料中的各种真菌毒素污染,已成为食用植物油的重要安全隐患,由此开展植物油中黄曲霉毒素检测探讨具有重要作用。免疫磁珠净化作为一种前处理手段用于植物油中黄曲霉毒素B1(AFB_1)的检测可以避开很多传统检测策略的缺点,同时和Hplc结合可以改善信噪比,提升检测策略的准确度并且减少了操作的时间,达到既定量准确又快速简便的要求,大大提升工作效率。本探讨建立了化学和生物免疫磁珠检测植物油中黄曲霉毒素B1的策略并取得了显著的运用效果。本探讨得到的主要结果和结论如下:1、利用化学共沉淀的策略,制备得到了主要成分为Fe_3O_4的超顺磁性纳米磁珠。磁珠外层的羟基和硅烷偶联剂氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)反应带上氨基基团。带上氨基的磁珠通过戊二醛活化之后发生醛基化,和AFB_1多克隆抗体偶联以而得到Fe_3O_4免疫磁珠。2、以无锡太湖水域中分离到了一种沿着磁力线运动的微好氧细菌-趋磁细菌,经过富集和细菌的生长培养,该趋磁细菌体内产生了粒径在15nm左右的磁性纳米颗粒—磁小体。将该纳米磁性粒子和抗体通过偶联剂偶联,得到了具有功能性的免疫磁小体。3、以制备得到的免疫磁珠为净化工具,建立了有机溶剂萃取、免疫磁珠净化、高效液相色谱法(HPLC)检测植物油样品中AFB_1的策略。该策略具有良好线性,相联系数达到0.9993,线性范围为2~50ng/mL。其中利用化学合成的免疫磁珠进行前处理,AFB_1加标回收率达到73.1%~82.9%,磁小体免疫磁珠为净化工具得到的加标回收率为87.5%~93.1%,并且整个前处理历程可以制约在30min内完成,具有快速、简便、准确性高等优点。关键词:磁性纳米粒子论文磁小体论文趋磁细菌论文AFB_1论文

    摘要3-4

    Abstract4-5

    缩写符号说明5-6

    目录6-8

    第一章 绪论8-18

    1.1 免疫磁珠概述8-12

    1.1.1 免疫磁珠的结构及特性8

    1.1.2 免疫磁珠的制备8-10

    1.1.3 免疫磁珠的特点10-11

    1.1.4 免疫磁珠的表征11-12

    1.1.5 免疫磁珠的运用12

    1.2 AFB_1概述12-15

    1.2.1 AFB_1的产生和分布12-13

    1.2.2 AFB_1的危害和毒性机理13

    1.2.3 AFB_1的检测策略13-14

    1.2.4 食品中 AFB_1的限量标准14

    1.2.5 植物油中 AFB_1的污染情况14-15

    1.3 探讨目的、作用及内容15-18

    1.3.1 探讨的目的及作用15

    1.3.2 探讨的内容15-18

    第二章 Fe_3O_4纳米磁珠的共沉淀法合成及与抗体的偶联18-26

    2.1 引言18

    2.2 实验部分18-20

    2.2.1 试剂与仪器18-19

    2.2.2 化学共沉淀法合成 Fe_3O_4纳米裸磁粒子19

    2.2.3 磁性纳米颗粒的氨基化修饰19

    2.2.4 氨基化磁珠的活化19-20

    2.2.5 磁珠和 AFB_1抗体的的偶联20

    2.3 结果与讨论20-24

    2.3.1 磁性纳米粒子的制备与表征20-23

    2.3.2 氨基化纳米磁珠与抗体的偶联反应23-24

    2.4 本章小结24-26

    第三章 趋磁细菌的分离及磁小体与抗体的偶联26-38

    3.1 引言26

    3.2 实验部分26-29

    3.2.1 试剂与仪器26-27

    3.2.2 趋磁细菌的分离与培养27

    3.2.3 趋磁细菌的鉴定浅析27-28

    3.2.4 磁小体的生成、电镜观察与能谱浅析28

    3.2.5 细菌和磁小体磁性浅析28

    3.2.6 磁小体和抗体的偶联28-29

    3.3 结果与讨论29-36

    3.3.1 趋磁细菌的分离与培养29

    3.3.2 趋磁细菌的单菌落分离29

    3.3.3 培养条件对菌株生长的影响29-30

    3.3.4 部分生理生化实验30

    3.3.5 菌株 16S rDNA 鉴定30-32

    3.3.6 电镜观察与能谱浅析32-34

    3.3.7 磁性浅析34-36

    3.3.8 磁小体和抗体的偶联36

    3.4 本章小结36-38

    第四章 免疫磁珠在植物油 AFB_1检测中的运用38-46

    4.1 序言38

    4.2 实验部分38-39

    4.2.1 仪器与试剂38

    4.2.2 免疫磁珠的制备38-39

    4.2.3 样品测定39

    4.2.4 Hplc 检测39

    4.3 结果与讨论39-45

    4.3.1 Fe_3O_4免疫磁珠与 AFB_1反应条件优化39-43

    4.3.2 磁小体免疫磁珠对 AFB_1的富集43

    4.3.3 策略的线性范围与检出限43-44

    4.3.4 加标回收实验44-45

    4.3.5 实际样品的测定45

    4.4 本章小结45-46

    主要结论46-48

    不足与展望48-50

    致谢50-52

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