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试议纯化莲子分离蛋白对小鼠抗衰老作用中心

收藏本文 2024-01-30 点赞:26967 浏览:120749 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:本论文以莲子作为原料,通过优化蛋白质的提取条件,采取DEAE-cellulose52纯化得到分离蛋白,评价其营养价值,并通过D-半乳糖致衰老小鼠实验进一步探讨分离蛋白的抗衰老作用,结果如下:1.采取Tris-HCl缓冲液浸提莲子中的总蛋白,并利用响应面法优化其提取条件,得到的最佳提取工艺为:液料比7.2:1,提取时间2.4h,提取温度11.1℃,此时总蛋白的提取率达到81.35%,与回归模型的相对误差小于0.5%。2.经透析除盐后的莲子蛋白再结合DEAE-cellulose52纯化,即用最佳工艺提取的蛋白液上样,用不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8mo1/L)的Tris-NaCl洗脱液梯度洗脱,得到的分离蛋白蛋白浓度为83.75%。氨基酸浅析后得出分离蛋白中氨基酸种类是16种,必需氨基酸的比例为57%,分离蛋白的氨基酸评分为48.2,化学评分为38.4,接近于WHO/FAO的氨基酸方式,生物价约为47,营养价值较全面。3.建立D-半乳糖致衰老的动物模型,分为正常组、模型组、高剂量组、低剂量组以及阳性对照组,通过测定血液以及肝脏、心脏、肾脏中的抗氧化指标(包括丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱时肽过氧化物酶(GSH-Px)的酶活力)以及皮肤中的羟脯氨酸的含量来探讨莲子分离蛋白的抗衰老活性,结果显示,高剂量的莲子分离蛋白(500mg/kg/d)能显著降低血液与内脏组织中的MDA含量,能显著提升CAT、GSH-Px、SOD的活力以及皮肤中的羟脯氨酸含量(P0.05),而低剂量(100mg/kg/d)的作用不显著(P0.05),但与模型组相比还是有一定的作用,阳性对照组(300mg/kg/d)的作用几乎介于两者之间,符合论述的剂量联系,且莲子分离蛋白对于抗氧化酶的作用力大小为:CATSODGSH-Px。并通过石蜡切片后的细胞观察,得出模型组中细胞核内含物显著增加、染色深,高剂量组与阳性对照组均能显著改善此现象,但低剂量组改善作用不显著,进一步证实了前面所测指标的准确性。由于关于莲子分离蛋白的抗衰老作用的体内探讨很少,故本实验的探讨成果为莲子的进一步开发利用与深入探讨提供了科学得论述依据。关键词:莲子分离蛋白论文DE-52纯化论文氨基酸评价论文衰老动物模型论文石蜡切片论文

    摘要4-5

    Abstract5-7

    目录7-9

    第1章 绪论9-20

    1.1 国内外莲子保健功能探讨进展9-10

    1.1.1 莲子9

    1.1.2 莲子的营养价值9-10

    1.2 国内外关于蛋白质提取纯化策略的探讨概况10-12

    1.3 国内外的衰老论述及对D-半乳糖衰老模型的探讨进展12-18

    1.3.1 国内外的衰老学说12-14

    1.3.2 衰老模型的探讨概况14-16

    1.3.3 衰老的细胞学体现16

    1.3.4 D-半乳糖衰老模型的探讨进展16-18

    1.4 本课题的探讨目的与作用18-19

    1.5 本课题探讨的主要内容19-20

    第2章 响应面法优化莲子总蛋白的提取工艺的探讨20-30

    2.1 材料与策略20-22

    2.1.1 材料与试剂20

    2.1.2 主要仪器设备20

    2.1.3 实验策略20-22

    2.2 结果与浅析22-25

    2.2.1 总蛋白提取率的单因素实验22-25

    2.3 响应面浅析法优化总蛋白的提取条件25-29

    2.3.1 响应面设计结果与浅析25-26

    2.3.2 模型的建立及方差浅析26-27

    2.3.3 总蛋白提取工艺的响应面浅析27-28

    2.3.4 总蛋白最佳提取工艺的确定及模型的验证28-29

    2.4 本章小结29-30

    第3章 莲子分离蛋白的提取及其氨基酸评价30-39

    3.1 材料与策略30-32

    3.1.1 材料与试剂30-31

    3.1.2 主要仪器与设备31

    3.1.3 实验策略31-32

    3.2 结果与浅析32-37

    3.2.1 莲子分离蛋白的提取结果32-33

    3.2.2 莲子分离蛋白的营养成分含量测定及氨基酸浅析33-37

    3.3 本章小结37-39

    第4章 莲子分离蛋白对D-半乳糖致衰老模型作用的探讨39-62

    4.1 材料与策略39-40

    4.1.1 材料与试剂39-40

    4.1.2 主要仪器与设备40

    4.2 实验策略40-44

    4.2.1 莲子分离蛋白的提取40

    4.2.2 实验分组与处理40

    4.2.3 样本处理及测定40-42

    4.2.4 数据处理42

    4.2.5 细胞观察(石蜡切片)42-44

    4.3 结果与浅析44-60

    4.3.1 模型的建立44-45

    4.3.2 小鼠体重的变化45-46

    4.3.3 各器官的重量变化46-47

    4.3.4 血液中不同实验时间10 d、20 d、40 d的MDA含量、GSH-PX以及SOD酶活力的比较47-49

    4.3.5 莲子分离蛋白对D-半乳糖致衰老模型体内血液及组织器官中抗氧化指标的影响49-59

    4.3.6 肝脏组织石蜡切片的观察结果59-60

    4.4 本章小结60-62

    全文结论62-63

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