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简谈菜籽菜籽饼粕蛋白酶法制备ACE抑制肽网

收藏本文 2024-01-27 点赞:27036 浏览:121547 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:高血压是全世界最大的流行病之一,在我国高血压发病率逐年增高,我国高血压患者中能有效制约血压的仅有3%。探讨表明,有效制约血压的重要策略是降低血管紧张素转换酶(Angiotensin Converting Enzyme, ACE)的活性。本探讨以菜籽粕为原材料提取出的菜籽蛋白为原料进行分步酶解,并对酶解工艺、脱色工艺、分离工艺进行了优化;对高活性的分离组分进行了结构探讨和性质评价。探讨结果如下:(1)筛选出碱性蛋白酶和中性蛋白酶作为分步水解菜籽蛋白的酶,通过Box-Behnken模型响应面法优化菜籽ACE抑制肽制备工艺,得到了酶解菜籽蛋白的回归方程为ACEI=+50.22600-0.29250×温度+0.47750×底物浓度+0.70250×酶与底物质量之比-0.11750×温度×底物浓度-1.11250×温度×酶与底物质量之比+1.41750×底物浓度×酶与底物质量之比-9.41175×温度2-2.45675×底物浓度2-3.83175×酶与底物质量之比2,方程最值求解,得到最优的水解条件为温度54.9℃、底物浓度5.65%、酶与底物的质量比6.5%,ACEI论述值为50.303%。实际验证得到ACE抑制率为50.12%、IC50为1.78mg/mL的ACE抑制肽,实际值接近于论述值。(2)对酶解液进行脱色,优化确定了最优工艺为:活性炭的用量1%、pH_3.0、温度80℃、时间50min,在此条件下测得脱色率为85.52%,ACE抑制率为57.83%,活性损失率为5.69%。(3)将脱色后冷冻干燥的菜籽ACE抑制肽粗品进行超滤分离探讨。确立了较佳的工艺条件为:第一级超滤(截留分子质量为10kDa),最佳料液浓度2%、料液温度40℃、操作压力0.3kg/cm~2;第二级超滤(截留分子质量为3kDa),最佳料液浓度2%、料液温度30℃、操作压力0.7kg/cm~2。原液的IC50值经过两级超滤后下降为1.33mg/mL,下降了25.3%,活性总回收率达到77.37%,小于3kDa的组分活性最高,其肽含量为82.85%。各组分的肽谱浅析表明有4个高活性的组分峰。(4)对高活性的分离组分的氨基酸浅析可知,菜籽ACE抑制肽和菜籽蛋白均由17种氨基酸组成(色氨酸未计),精氨酸(18.19mg/100mg)、谷氨酸(12.58mg/100mg)、天门冬氨酸(10.05mg/100mg)是菜籽ACE抑制肽主要的氨基酸组成部分,呈味氨基酸的含量及其丰富;紫外扫描图谱表明最大吸收峰在216.0nm;红外扫描图谱显示了酰胺键、糖环、O-H、N-H、 C=O、C-N,-CH_3等基团的有着。(5)理化性质探讨表明:菜籽ACE抑制肽的溶解性基本不受pH值的影响、黏度在其浓度5%~20%的范围内变化不大、耐热耐酸碱性较强。菜籽ACE抑制肽的吸油性、起泡性、乳化稳定性低于菜籽蛋白,而吸水性和乳化性要高于菜籽蛋白。关键词:菜籽论文ACE论文酶解论文超滤论文性质论文

    摘要4-6

    ABSTRACT6-11

    第1章 绪论11-18

    1.1 菜籽蛋白11-12

    1.1.1 菜籽蛋白资源概况11

    1.1.2 菜籽蛋白营养特点11

    1.1.3 菜籽蛋白的制备及国内外菜籽蛋白产品的开发情况11-12

    1.2 ACE 和 ACE 的升压作用12-13

    1.3 菜籽 ACE 抑制肽13-15

    1.3.1 菜籽 ACE 抑制肽制备的探讨进展13-14

    1.3.2 ACE 抑制肽分离纯化的探讨进展14-15

    1.4 立题的目的、作用和探讨的主要内容15-18

    1.4.1 本课题的立题目的和作用15-16

    1.4.2 主要探讨内容16-18

    第2章 菜籽 ACE 抑制肽的制备18-32

    2.1 材料与策略18-22

    2.1.1 材料与试剂18-19

    2.1.2 主要仪器19

    2.1.3 策略19-22

    2.2 结果与浅析22-31

    2.2.1 酶活力测定的标准曲线22-23

    2.2.2 几种蛋白酶的酶活力23

    2.2.3 不同蛋白酶酶解菜籽蛋白的 ACE 抑制率(酶组合)23-24

    2.2.4 不同酶解条件对 ACE抑制率作用浅析(单因素)24-25

    2.2.5 响应面浅析酶解优化条件25-30

    2.2.6 多肽含量的测定30-31

    2.3 结论31-32

    第3章 菜籽蛋白水解液的脱色探讨32-39

    3.1 材料与策略32-34

    3.1.1 材料与试剂32

    3.1.2 主要仪器32-33

    3.1.3 策略33-34

    3.2 结果与浅析34-38

    3.2.1 活性炭用量对菜籽 ACE 抑制肽酶解液脱色效果的影响34

    3.2.2 pH 对菜籽降 ACE 抑制酶解液脱色效果的影响34-35

    3.2.3 温度对菜籽降压肽酶解液脱色效果的影响35-36

    3.2.4 吸附时间对菜籽 ACE 抑制肽酶解液脱色效果的影响36

    3.2.5 正交实验设计及结果浅析36-38

    3.3 结论38-39

    第4章 超滤技术分离菜籽 ACE 抑制肽工艺探讨39-47

    4.1 材料与策略39-42

    4.1.1 材料与试剂39

    4.1.2 主要仪器39-40

    4.1.3 策略40-42

    4.2 结果与浅析42-46

    4.2.1 多肽液浓度对膜通量的影响42-43

    4.2.2 温度对超滤膜通量的影响43

    4.2.3 压力对膜通量的影响43-44

    4.2.4 超滤后各组分的半抑制浓度极其活性回收率44-45

    4.2.5 超滤后双低油菜籽 ACE 抑制肽的肽谱45-46

    4.3 结论46-47

    第5章 菜籽 ACE 抑制肽的结构探讨及性质评价47-60

    5.1 材料与策略49-52

    5.1.1 材料与试剂49

    5.1.2 主要仪器49

    5.1.3 策略49-52

    5.2 结果与浅析52-58

    5.2.1 菜籽 ACE 抑制肽的紫外扫描图谱52

    5.2.2 氨基酸浅析结果52-53

    5.2.3 菜籽 ACE 抑制肽的红外扫描图谱53-54

    5.2.4 菜籽 ACE 抑制肽成分浅析54

    5.2.5 菜籽 ACE 抑制肽的溶解性54-55

    5.2.6 吸水性、吸油性、起泡性、乳化性和乳化稳定性测定结果55-56

    5.2.7 菜籽籽 ACE 抑制肽的黏度56

    5.2.8 菜籽 ACE 抑制肽的热稳定性56-57

    5.2.9 菜籽 ACE 抑制肽的酸碱稳定性57-58

    5.3 结论58-60

    第6章 结论与展望60-63

    6.1 主要结论60-62

    6.2 工作展望62-63

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