本站原创
摘要：扩增片段长度多态性(Amppfication Fragment Length Polymorphi AFLP)是一种新的分子标记技术。其基本原理是：利用两种限制性内切酶对目的基因组双酶切，在酶切片段上加上人工接头后，利用经巧妙设计的引物对酶切片段选择性扩增，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增片段的多态性。在AFLP中，如果酶切片段内发生插入、缺失、及内切酶识别位点发生碱基突变等情况，则酶切片段的长度、数目将发生改变，而这些都将在聚丙烯酰胺凝胶上反映。荧光AFLP(fluorescent Amppfication Fragment Length Polymorphi fAFLP)是AFLP的改进方法。其基本原理与常规AFLP相同，但在选择性扩增引物的5’端标记上了荧光物质(一般为5’FAM、ROX、JOE等)，在测序仪上电泳时，激光的激发，产生不同波长的荧光，能被测序仪自动生成图像。与常规AFLP相比，fAFLP具有数据自动化、定量化、灵敏性更好、速度更快、效率更高等特点，能节省大量的时间和物资。本研究利用AFLP技术对Vc-Ⅰ系、Vc-Ⅱ系獭兔、日本大耳白兔(JWR)、青紫蓝兔(QZL)和新西兰兔(NZR)5个群体及27个个体的遗传结构了分析。在比较了MseⅠ—EcoRⅠ和MseⅠ—PstⅠ两种限制性内切酶组合酶切后的扩增效果后，选用MseⅠ—PstⅠ酶切组合，16条引物共1567个标记，平均每对引物扩增出49个；428条为可变标记，平均每对引物扩增出13个可变标记，AFLP标记多态率达27％。AFLP分析的结果，利用PHLYTOOLS软件计算出了27个个体及5个群体的共有带率(F)及遗传距离指数(D)，27个个体的遗传距离介于0.01．—0.137之间；5个群体的共有带率介于0.899—0.989之间，遗传距离介于0.011—0.101之间。5个群体中，Vc-Ⅰ与Vc-Ⅱ遗传距离最近，为0.011；Vc-Ⅱ与NZR遗传距离最远，为0.101。在此基础上绘制了27个个体及5个群体的亲缘关系聚类图。结果，个体聚类情况与取样的情况一致，群体聚类的亲缘关系的远近与育种历史一致。本研究还探索了荧光AFLP(fAFLP)技术及其应用。反应条件的优化。建立了荧光AFLP反应体系，为大样本群体的高效分析了方法，并应用fAFLP技术一条Vc-Ⅰ系、Vc-Ⅱ系獭兔特有的指纹条带，对它了回收测序，它可作为区分獭兔与其它品种兔的种间标记，用于品种鉴定及标记辅助选择等。关键词：兔论文AFLP论文fAFLP论文遗传距离论文分子标记论文
中文摘要7-9
前言9-11
文献综述11-19
1 AFLP的原理及实验程序11-12
2 AFLP技术的特点12-14
3 AFLP的研究进展14-19
与方法19-28
1.1 19
1.2 方法19-28
1.2.1 常规AFLP分析19-24
1.2.2 荧光AFLP反应体系的建立及分析24-28
结果28-37
讨论37-44
44-45