本站原创摘要2-3
Abstract3-7
缩略词表7-8
1. 前言8-15
1.1 转基因番茄口服疫苗研究进展8-13
1.1.1 番茄口服疫苗的优点8-9
1.1.2 番茄口服疫苗的研究进展9-12
(1) 乙肝病毒转基因番茄口服疫苗9-10
(2) 口蹄疫病毒转基因番茄口服疫苗10
(3) 霍乱毒素B亚单位转基因番茄口服疫苗10-11
(4) 其它转基因番茄口服疫苗11-12
1.1.3 番茄口服疫苗面临的问题及解决方法12
1.1.4 应用前景12-13
1.2 抗Ⅰ型糖尿病多肽P277及热击蛋白HSP65的研究背景13-15
2. 与方法15-31
2.1 植物15
2.2 质粒和菌株15
2.3 常用试剂15-16
2.3.1 限制性内切酶15
2.3.2 培养基及常用试剂的配置15-16
(1) 植物生长调节剂及抗生素的配置15-16
(2) 细菌培养用培养基16
(3) 组织培养用培养基16
2.4 主要仪器16
2.5 植物表达载体的构建16-24
2.5.1 构建载体所用引物16
2.5.2 植物表达载体的构建策略16-17
2.5.3 PCR扩增HSP65、HSP65-6×P277片段17-18
2.5.4 PCR产物的胶回收18
2.5.5 纯化的PCR产物双酶切、割胶回收18-19
2.5.6 载体pCAMBIA2301-35s-rbc的质粒提取,酶切及胶回收19-21
(1) 活化菌株19
(2) 提取pCAMBIA2301-35s-rbc的质粒19-20
(3) 对pCAMBIA2301-35s-rbc质粒双酶切20-21
(4) 胶回收pCAMBIA2301-35s-rbc质粒双酶切21
2.5.7 pCAMBIA2301载体与HSP65、HSP65-6×P277酶切片段的连接和转化21-22
(1) pCAMBIA2301载体与HSP65、HSP65-6×P277酶切片段的连接21
(2) 大肠杆菌JM109感受态细胞制备(CaC12法)21-22
(3) 连接产物的转化(热激法)22
2.5.8 植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277、pCAMBIA2301-HSP65的鉴定22-23
(1) 重组载体的PCR鉴定22-23
(2) 重组质粒的双酶切鉴定23
2.5.9 农杆菌EHA105感受态的制备、转化和鉴定23-24
(1) 农杆菌EHA105电激感受态的制备23
(2) 农杆菌EHA105的电激转化23-24
(3) 鉴定24
2.6 植物表达载体对烟草的转化24-29
2.6.1 农杆菌菌液的活化24
2.6.2 叶盘化法侵染烟草24-25
(1) 侵染24-25
(2) 共培养25
(3) 筛选及分化培养25
(4) 生根培养25
(5) 移栽25
2.6.3 转基因烟草的PCR检测25-27
(1) 转基因烟草基因组DNA的提取25-26
(2) 转基因烟草NPT-Ⅱ基因的PCR检测26
(3) 转基因烟草目的基因的PCR检测26-27
2.6.4 转基因烟草RT-PCR检测27-29
(1) 转基因烟草RNA的提取27
(2) cDNA链的合成27-28
(3) 目的基因的RT-PCR分析28-29
2.7 植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65、pCAMBIA2301-HSP65-6×P277对番茄的转化29-31
2.7.1 农杆菌菌液的活化29
2.7.2 番茄子叶的遗传转化29-30
(1) 种子的消毒及播种29
(2) 外植体的预培养、侵染及共培养29-30
(3) 脱菌培养、筛选培养、壮苗及植株再生30
2.7.3 转基因番茄PCR检测30
(1) 转基因番茄基因组DNA的提取30
(2) 转基因番茄目的基因的PCR检测30
2.7.4 转基因番茄的RT-PCR检测30-31
(1) 转基因番茄RNA的提取30-31
(2) RT-PCR法检测目的基因31
3. 结果与分析31-44
3.1 植物表达载体pCAMBIA2301.HSP65-6×P277、pCAMBIA2301-HSP65的构建31-33
3.2 农杆菌的转化检测33-35
3.3 转基因烟草抗性苗的和检测35-39
3.3.1 转基因烟草抗性植株的PCR检测35
3.3.2 转基因烟草抗性植株的RT-PCR检测35-39
3.4 番茄抗性苗的和检测39-44
3.4.1 番茄抗性植株的PCR检测39
3.4.2 转基因番茄抗性植株的RT-PCR检测39-44
4. 讨论44-47
4.1 植物表达载体的构建44
4.2 番茄组培中的问题及解决方法44-45
4.2.1 褐化问题44-45
4.2.2 番茄的预培养45
4.2.3 污染问题45
4.3 外源基因在转基因植株中的表达45-47
5. 全文47-48