试议乳糜基于天然与重组乳糜微粒模型亲脂性药物口服经淋巴吸收机制书写-turnitin论文查重

摘要：经淋巴通路是脂溶性药物口服吸收的重要途径之一,有关口服经淋巴吸收的机制探讨表明脂溶性药物与乳糜在肠上皮细胞内结合是药物经淋巴转运的关键历程。采取体外天然乳糜结合模型可以很好地预测药物的经淋巴吸收走势。然而,该模型尚有许多有待改善的地方,主要包括纳入的模型药物数量有限,并且用于浅析的理化参数也涵盖得不够,导致对结果的浅析有局限性。本论文以大鼠天然乳糜微粒为模型,扩大模型药物的数量,增加待考察的理化参数的数量,以建立药物理化性质与乳糜结合率之间的联系。在此基础上,建立种重组乳糜模型,进行药物结合率考察,通过与天然乳糜结合率的相关浅析,对其作为天然乳糜替代品的可行性进行评价。本论文采取超速密度梯度离心法来分离大鼠血浆中的乳糜微粒,并对其粒径、形态、电泳行为、甘油三酯含量等进行了表征。以粒径、甘油三酯浓度为指标进行了稳定性考察。结果表明,乳糜微粒的粒径范围介于50-350nm,其形态呈圆整的球形。琼脂糖电泳实验结果表明,乳糜微粒停留在原点,而其他作为参照的脂蛋白均发生了不同程度的迁移。天然乳糜微粒中,甘油三酯浓度约4.85±0.26mmol/1,胆固醇浓度约0.544±0.0081mmol/l。制得的乳糜微粒在-20℃条件下能维持稳定约2个月。建立了二十余种模型药物与乳糜微粒结合率的浅析测定策略。策略学探讨结果表明线性、回收率、精密度等学符合生物样品的浅析要求测定了模型药物在长链甘油三酯中的溶解度(SLCT),并通过查阅SciFinder Scholar2007而整理出可能对药物与乳糜微粒结合率有影响的理化参数12个分别为氢键供体数、氢键受体数、自由旋转键、logD、logP、pKa、分了体积、分子量、熔点、极性表面积、药物地长链油三酯中的溶解度以及密度。利用SAS8.1软件中的偏最小二乘回归法对建立的天然乳糜微粒模型进行浅析。以这12个理化参数为自变量,药物-乳糜微粒结合率为因变量,进行了数据浅析和拟合。结果表明SLCT、logP、logD是最重要的起正相关作用的因素。药物与天然乳糜微粒的结合是一个复杂的历程,无法仅用一两个理化参数就达到准确地描述的目的,需要同时考虑多个参数的共同作用。用PLS回归浅析建立了药物与乳糜微粒结合的数学联系式。将根据该数学模型的预测值对实测值进行线性回归,回归系数值达到0.9813,说明二者间具有良好的相关性,表明实验建立的天然乳糜微粒结合模型可以用于预测未知化合物与乳糜微粒的结合情况,进而推测未知化合物的淋巴转运潜力。由于提取乳糜微粒需要牺牲大量的动物,且动物间有着批间差别,会影响乳糜微粒结合实验的结果。为了寻找此模型的代替品,以橄榄油、1-α-磷酸卵磷脂、溶血卵磷脂、胆固醇甾酯及胆固醇为材料,用薄膜分散法制备了模拟乳糜微粒的乳剂——重组乳糜微粒。以粒径、透射电镜、甘油三酯含量检测等策略对制备的重组乳糜微粒进行了表征。以粒径、甘油三酯含量为指标对其进行了稳定性考察。结果表明,重组乳糜微粒平均粒径约226.3nm,甘油三酯浓度约5.95±0.14mmol/l.胆固醇浓度约0.77±0.06mmol/l.在理化性质上与天然乳糜微粒比较接近。稳定性实验中,重组乳糜微粒在-20℃条件下能维持稳定约15天。测定了模型药物与rCM的结合率,在此基础上对天然和重组乳糜微粒结合模型的相关性进行了考察,发现二者的相关性良好,表明制备的重组乳糜微粒能够较好地取代由大鼠血浆中提取的乳糜微粒。由于重组乳糜微粒所需的材料易得,生物相容性好,制备工艺简便,所需设备也并不复杂,能够节约大量时间及实验资源,同时避开了动物模型的个体差别。作为一种新型的淋巴吸收探讨模型,有着潜在的运用前景。关键词：乳糜微粒论文淋巴吸收论文亲脂性药物论文重组乳糜微粒论文偏最小二乘回归论文

中文摘要7-9

Abstract9-12

前言12-16

第一部分基于天然乳糜微粒模型的口服经淋巴吸收的机制探讨16-52

1. 试剂、仪器及动物16-19

1.1 药品与试剂16-17

1.2 仪器17-18

1.3 实验动物18-19

2. 实验策略19-30

2.1 天然乳糜微粒悬液的制备19-20

2.1.1 密度梯度溶液的配制19

2.1.2 天然乳糜微粒的分离策略和流程19-20

2.1.3 乳糜微粒悬液的配制20

2.2 天然乳糜微粒的表征20-22

2.2.1 粒径20

2.2.2 电泳行为20

2.2.3 甘油三酯及胆固醇浓度测定20-21

2.2.4 透射电镜(Tranission electron microscopy,TEM)21

2.2.5 稳定性21-22

2.2.5.1 甘油三酯浓度21

2.2.5.2 粒径21

2.2.5.3 丙二醇对结合率测定的影响21-22

2.3 模型药物理化参数的获得22-23

2.3.1 基本理化参数22

2.3.2 药物的S_(LCT)测定22-23

2.3.2.1 溶解度测定Hplc策略的建立与评价22-23

2.3.2.1.1 色谱条件22

2.3.2.1.2 标准曲线22

2.3.2.1.3 准确度22

2.3.2.1.4 精密度22-23

2.3.2.2 模型药物在长链甘油三酯(LCT)中的溶解度23

2.4 模型药物的含量测定策略23-28

2.4.1 乳糜微粒样品预处理策略23-24

2.4.2 色谱条件24-28

2.4.3 乳糜微粒样品标准曲线的建立28

2.4.4 乳糜微粒样品浅析策略的评价28

2.4.4.1 策略精密度28

2.4.4.2 策略回收率28

2.5 模型药物与天然乳糜微粒的结合28-29

2.6 药物-天然乳糜微粒结合率与药物理化参数之间数学联系模型的建立29-30

2.7 天然乳糜结合模型预测能力的评价30

3. 结果与讨论30-50

3.1 天然乳糜微粒的表征30-34

3.1.1 粒径30-31

3.1.2 电泳行为31-32

3.1.3 甘油三酯及胆固醇浓度32

3.1.4 透射电镜32-33

3.1.5 稳定性考察33-34

3.1.5.1 甘油三酯浓度33

3.1.5.2 粒径33-34

3.1.5.3 丙二醇对结合率测定的影响34

3.2 模型药物理化参数的获得34-38

3.2.1 基本理化参数34-36

3.2.2 药物在TG中的溶解度测定36-38

3.2.2.1 模型药物S_(LCT)测定策略的验证36-38

3.2.3 模型药物的S_(LCT)38

3.3 模型药物含量测定策略的建立与评价38-45

3.3.1 策略专属性38

3.3.2 标准曲线及线性范围38-40

3.3.3 策略精密度40-42

3.3.4 策略回收率42-45

3.4 模型药物与乳糜微粒的结合45-47

3.5 药物-乳糜微粒结合率与药物理化参数之间数学联系模型的建立47-49

3.6 天然乳糜微粒模型预测能力的评价49-50

4. 小结50-52

第二部分重组乳糜微粒(rCM)模型的建立及其在口服经淋巴吸收机制探讨方面的运用52-70

1. 试剂与仪器52

1.1 药品与试剂52

1.2 仪器52

2. 实验策略52-56

2.1 rCM的制备52-53

2.2 rCM的表征53

2.2.1 粒径53

2.2.2 廿油三酯及胆固醇浓度53

2.2.3 稳定性53

2.2.3.1 粒径53

2.2.3.2 甘油三酯浓度53

2.2.4 透射电镜53

2.3 模型药物的含量测定策略53-54

2.3.1 rCM样品的预处理策略53

2.3.2 色谱条件53

2.3.3 标准曲线的建立53-54

2.3.4 rCM浅析策略的评价54

2.3.4.1 策略精密度54

2.3.4.2 策略回收率54

2.4 模型药物与rCM的结合54-55

2.5 rCM与天然乳糜微粒的相关性浅析55

2.6 基于rCM的药物-rCM结合率与药物理化参数数学联系模型的建立55-56

2.7 rCM结合模型预测能力的评价56

3. 实验结果56-69

3.1 rCM的表征56-58

3.1.1 粒径56-57

3.1.2 甘油三酯及胆固醇浓度57

3.1.3 稳定性57-58

3.1.3.1 甘油三酯浓度57

3.1.3.2 粒径57-58

3.1.4 透射电镜58

3.2 模型药物含量测定策略的建立与评价58-62

3.2.1 rCM样品的预处理策略58

3.2.2 色谱条件58-59

3.2.3 标准曲线及线性范围59

3.2.4 rCM样品浅析策略的评价59-62

3.2.4.1 策略精密度59-61

3.2.4.2 策略回收率61-62

3.3 模型药物与rCM的结合62-64

3.3.1 洗脱曲线62-64

3.3.2 模型药物与rCM的结合情况64

3.4 rCM结合模型与天然乳糜微粒结合模型的相关性浅析64-65

3.5 基于rCM的药物-rCM结合率与药物理化参数数学联系模型的建立65-68

3.6 rCM模型预测能力的评价68-69

4. 小结69-70

全文总结70-71

试议乳糜基于天然与重组乳糜微粒模型亲脂性药物口服经淋巴吸收机制书写

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