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摘要：目的骨肉瘤是一种恶性程度极高的恶性肿瘤,预后是很差的,骨肉瘤进展迅速,如果未经正规的处理,一年内就会发生肺肿瘤转移,导致患者存活率很低,截肢后3-5年存活率仅为5-15%。同其他恶性肿瘤一样,骨肉瘤严重影响着人们健康。但是骨肉瘤的特点与其他肿瘤不同,骨肉瘤特别好发于一类人群,那就是青少年群体。近年来越来越多的长链非编码RNA (lncRNAs)被发现,这些lncRNA被发现与很多疾病的发生进展有着密切的联系,包括肿瘤。在这篇论文中,我们首先浅析lncRNAs的结构、功能、机制,然后通过基因芯片的结果结合文献找出最有探讨价值的1ncRNAs,接着运用real time PCR技术验证基因芯片的结果,最后我们浅析结果,找出lncRNAs在骨肉瘤治疗中的潜在性的作用以及对预后预测的分子靶点。策略本探讨采取本科室已有的上海康成生物芯片公司基于8例骨肉瘤标本的芯片结果,初步获得了骨肉瘤异常表达的基因,结合文献进一步浅析在骨肉瘤发生进展中可能起着重要作用的基因,以而筛选出11个表达上调的LncRNA,12个表达下调的LncRNA,进一步利用分子生物学实验real-time PCR验证筛选出骨肉瘤中异常表达的LncRNA.结果1以骨肉瘤基因芯片结果为基础,在骨肉瘤组织中获得了251个异常表达的基因,其中表达上调的有68个,表达下调的有183个2结合文献浅析,找出23个具有探讨价值的LncRNA,其中表达上调的有11个,表达下调的有12个,它们分别为：ASLNC21868、 ASLNC23518、ASLNC24291、 ASLNC23844、 exon4713、 AW606502、 ASLNC21888、DQ786309、BQ183547、 BU617029、 D20368. ASLNC17568、BF995651、 026910、 ASLNC18376、 131233、 BX649136、ASLNC03769、 ASLNC13744、 ASLNC19675、 ASLNC01877、 ASLNC11197、 ASLNC21134、 BM7206003通过实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR)技术对ASLNC01877这个基因在骨肉瘤组织中的表达进行检测,发现ASLNC01877这个基因在骨肉瘤中的表达确实比在癌旁组织中低,这与基因芯片的方向一致。结论1利用基因芯片发现骨肉瘤组织中确实有着大量表达上调或者下调的lncRNA2利用real-time PCR技术对其中的一个LncRNA进行验证,该结果与基因芯片结果具有同方向性。为进一步探讨骨肉瘤提供了线索。关键词：长链非编码RNA(IncRNA)论文结构论文骨肉瘤论文治疗论文
摘要4-6
ABSTRACT6-10
第一章 前言10-15
1.1 lncRNA探讨背景和作用10-11
1.2 lncRNA探讨近况11-13
1.3 本论文探讨目标13-15
第二章 材料和策略15-22
2.1 材料15-17
2.1.1 标本的采集15
2.1.2 标本的保存15-16
2.1.3 主要的试剂盒试剂盒16
2.1.4 其他常用试剂16-17
2.1.5 实验仪器17
2.2 实验策略17-22
2.2.1 以骨肉瘤组织及癌旁组织中提取RNA17-18
2.2.2 RNA中痕量gDNA的去除18
2.2.3 逆转录18
2.2.4 相关基因引物18-19
2.2.5 实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)19-22
第三章 结果22-26
3.1 骨肉瘤中ASLNC01877基因表达检测结果22-25
3.2 记录CT值并计算ΔΔCt的均值25
3.3 小结25-26
第四章 讨论26-28
第五章 结论28-29