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纯化粒毛盘菌YM281多糖发酵、结构与其降脂利肝活性

收藏本文 2024-01-15 点赞:10273 浏览:36994 作者:网友投稿原创标记本站原创

摘要:本论文对粒毛盘菌YM281多糖的发酵产量、纯化、结构及降脂利肝活性行了探讨,主要结果如下:对粒毛盘菌YM281胞内多糖(LIP)、胞外多糖(LEP)产量进行同步优化。结果表明,LIP产量(Y)与生物量(Z)呈显著的线性联系:Z=12.561Y-0.0148; LIP产量(Y)与LEP产量(X)呈正相关,但线性联系并不显著,由此为了同步提升二者的产量,利用满意度函数将两个响应变量(X、Y)整合到单一目标响应变量中,并结合均匀设计对粒毛盘菌YM281产LIP、 LEP的发酵条件进行同步优化,在所得最佳发酵条件(葡萄糖46.6g/L,酵母膏14.6g/L,甘氨酸6.50mg/L,初始pH7.5,25℃发酵12天,其他条件同基础发酵条件)下, LIP和LEP产量分别为2.35g/L和6.28g/L,较优化前分别提升了1.4倍和1.2倍。对粒毛盘菌YM281胞外多糖的纯化、结构、构象进行探讨。结果表明,粒毛盘菌YM281胞外多糖(LEP)经Cellulose DEAE-52、SepharoseCL-6B柱层析获得单一组分(LEP-1b),采取高效液相凝胶渗透色谱法(HPGPC)测得LEP-1b分子量约为4.02×104Da。经酸水解、化浅析、高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解、UV、IR及NMR浅析推断LEP-1b是一种(1→3)-,(1→6)-β-D-葡聚糖。LEP-1b主链是由β-1,3-D-吡喃型葡萄糖残基组成,平均每5个葡萄糖残基为一个重复单元,每个重复单元具有一个支链,支链由2个D-吡喃型葡萄糖残基以β-1,3-键型组成,并以β-1,6-键连接在主链葡萄糖的6位碳上,其重复单元如下:且构像浅析表明LEP-1b具有三螺旋构象。对粒毛盘菌YM281胞外多糖(LEP-1b)的降脂利肝活性进行探讨。结果表明,LEP-1b能有效降低高血脂性脂肪肝模型小鼠血清脂质(TC、TG、 LDL-C)水平、肝脏脂质(TC、 TG、脂肪)水平及动脉粥样化指数(AI),增加血清HDL-C水平,增加粪便脂质(胆汁酸、TC、脂肪)排出量,降低血清转氨酶(ALT、AST)活性、肝组织丙二醛(MDA)含量及肝脏指数,增加肝组织超氧歧化酶(SOD)活性,推动肝组织损伤修复,且呈一定的量效联系。以上结果表明LEP-1b对高血脂性脂肪肝模型小鼠有降脂利肝作用。关键词:粒毛盘菌YM281论文多糖论文纯化论文结构论文降脂利肝论文

    摘要5-7

    ABSTRACT7-9

    致谢9-15

    第一章 绪论15-21

    1.1 真菌多糖的提取纯化15-17

    1.1.1 真菌多糖的提取15

    1.1.2 真菌多糖的纯化15-16

    1.1.3 多糖的纯度及分子量测定16-17

    1.2 真菌多糖的结构剖析17

    1.2.1 真菌多糖的结构层次17

    1.2.2 真菌多糖的结构剖析17

    1.3 真菌多糖的构效联系17-18

    1.4 真菌多糖的分子修饰18

    1.5 真菌多糖的生理功能18-19

    1.5.1 降血糖、血脂、血压,抗血栓功能18

    1.5.2 利肝健胃功能18-19

    1.5.3 抗癌、免疫调节功能19

    1.5.4 抗氧化、抗衰老功能19

    1.5.5 其他生理功能19

    1.6 粒毛盘菌属多糖探讨的概况19-20

    1.7 本课题探讨的内容与作用20-21

    第二章 粒毛盘菌 YM281 胞内、外多糖产量的同步优化21-31

    2.1 引言21

    2.2 材料和策略21-24

    2.2.1 材料21

    2.2.2 主要试剂和仪器21-22

    2.2.3 菌株培养22-23

    2.2.4 生物量测定23

    2.2.5 LEP 产量测定23

    2.2.6 LIP 产量测定23

    2.2.7 多糖测定标准曲线的绘制23

    2.2.8 LIP 产量与生物量及 LEP 产量的相关性探讨23

    2.2.9 满意度 D 值的计算23-24

    2.2.10 单因素试验24

    2.2.11 均匀试验24

    2.3 结果与浅析24-30

    2.3.1 多糖测定标准曲线的绘制24-25

    2.3.2 LIP 产量与 LEP 产量及生物量的相关性25

    2.3.3 碳、氮源对 LIP、 LEP 产量及整体满意度 D的影响25-26

    2.3.4 生长因子对 LIP、 LEP 产量及整体满意度 D 的影响26

    2.3.5 初始 pH 对 LIP、 LEP 产量及整体满意度 D 的影响26-27

    2.3.6 发酵时间对 LIP、 LEP 产量及整体满意度 D 的影响27-28

    2.3.7 匀试验结果28-30

    2.4 本章小结30-31

    第三章 粒毛盘菌 YM281 胞外多糖的提取纯化及结构剖析31-49

    3.1 引言31

    3.2 材料和策略31-35

    3.2.1 材料31

    3.2.2 主要试剂和仪器31-32

    3.2.3 粒毛盘菌 YM281 胞外多糖发酵提取32-33

    3.2.4 粒毛盘菌 YM281 胞外多糖纯化33

    3.2.5 粒毛盘菌 YM281 胞外多糖( LEP)的分级分离33

    3.2.6 多糖单一组分( LEP-1b)纯度和分子量的测定33

    3.2.7 LEP-1b 单糖组分浅析33-34

    3.2.8 高碘酸氧化和 Smith 降解34

    3.2.9 LEP-1b 的化浅析34-35

    3.2.10 LEP-1b 的部分酸水解浅析35

    3.2.11 LEP-1b 的紫外光谱浅析35

    3.2.12 LEP-1b 的红外光谱浅析35

    3.2.13 LEP-1b 的核磁共振浅析35

    3.2.14 LEP-1b 构象浅析35

    3.3 结果与浅析35-47

    3.3.1 LEP 的发酵、提取纯化35-37

    3.3.2 LEP 的分级分离37-38

    3.3.3 LEP-1b 的纯度和分子量检测38-39

    3.3.4 LEP-1b 的结构剖析39-45

    3.3.5 LEP-1b 的构象浅析45-47

    3.4 本章小结47-49

    第四章 粒毛盘菌 YM281 胞外多糖的降脂利肝活性49-59

    4.1 引言49

    4.2 材料和策略49-53

    4.2.1 材料49

    4.2.2 主要试剂和仪器49-51

    4.2.3 动物实验51

    4.2.4 血清和肝脏中脂质的测定51-52

    4.2.5 血清和肝脏酶活及 MDA 含量测定52

    4.2.6 粪便总胆汁酸、总胆固醇及脂肪排泄量测定52

    4.2.7 肝组织形态学观察52-53

    4.2.8 统计浅析53

    4.3 结果与浅析53-58

    4.3.1 模型小鼠建造53-54

    4.3.2 LEP-1b 对小鼠摄食量和生长的影响54

    4.3.3 LEP-1b 对小鼠血清、肝脏及粪便中脂质代谢的影响54-56

    4.3.4 LEP-1b 的利肝活性56-58

    4.4 本章小结58-59

    第五章 结论与展望59-61

    5.1 结论59

    5.2 革新点59-60

    5.3 展望60-61

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