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摘要：糖尿病是由于胰岛素分泌绝对或者相对不足导致慢性持续性高血糖状态引起的一组代谢异常综合症,可伴有或者不伴有胰岛素抵抗。流行病学调查表明,到2030年,糖尿病的患病率将以2000年的2.8%上升到4.4%。动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是糖尿病尤其是2型糖尿病最常见的心血管并发症之一。不稳定斑块的破裂会导致心肌梗塞,脑卒中,外周血管疾病等,是主要的致死和致残理由。糖尿病患者动脉粥样硬化发生早,进展快,病程中具有隐蔽性,但后果严重,致死和致残率高。由此,最理想的治疗应该是在糖尿病动脉粥样硬化并发症出现早期进行干预,甚至进行一级预防。动脉粥样硬化的形成涉及一系列复杂的病理生理历程,包括内皮损伤,氧化低密度脂蛋白(LDL)堆积,巨噬细胞激活,胶原沉积,血管平滑肌细胞增殖,迁移能力的增强以及表型转变。大量临床以及实验探讨表明,慢性高血糖状态是糖尿病患者动脉粥样硬化形成和加速的重要危险因素,高血糖可以通过多种信号转导系统,影响血管平滑肌细胞的功能,最终导致动脉粥样硬化的形成。有探讨表明,高糖能够显著增强血管平滑肌细胞的增殖和迁移能力。并且该探讨进一步证实蛋白激酶C(Protein kinase C, PKC)信号通路可能介导了高糖诱导的血管平滑肌细胞的增殖和迁移。另有探讨表明,高糖诱导的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)信号通路的激活参与了高糖导致的血管功能损害。由此,PKC, MAPK等信号通路在糖尿病患者动脉粥样硬化的发病机制中起重要作用,抑制心肌细胞PKC,或者MAPK的表达对糖尿病动脉粥样硬化的防治具有重要作用。灯盏花素(Breviscapine)是以菊科属植物短亭飞蓬全草灯盏细辛中提取的一类黄酮类成分,具有扩张血管,降低血管阻力,增加血流量,改善微循环以及抗血小板聚集的作用,目前已广泛运用于心脑血管疾病的治疗,具有良好的耐受性和安全性。灯盏花素抑制PKC活性的作用已被大量的文献证明,并且其可抑制高糖所诱导的c-fos, c-jun蛋白表达与Ⅳ型胶原合成增加。例如有探讨表明,灯盏花素对糖尿病肾病具有保护性作用,其机理可能与其抑制PKC的表达和活性有关。另有探讨证实,灯盏花素能够改善糖尿病大鼠的心功能,并且能够逆转高糖或者血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥厚,并且该探讨进一步证实PKC信号通路可能介导了其保护作用。近年来,随着对灯盏花素探讨的不断深入,其对其他信号通路的影响也已被发现,一个新近的探讨表明,灯盏花素能够抑制p38和ERK1/2MAPK信号通路,可能与其抑制心脏成纤维细胞增殖以及胶原合成有关。虽然已有报道表明灯盏花素能够降低动脉粥样硬化大鼠的致动脉粥样硬化指数,对动脉粥样硬化具有保护性作用,但其具体作用靶点尚未明确。并且关于灯盏花素对糖尿病所致的动脉粥样硬化并发症是否同样具有保护作用及其相关机制,目前尚未明确。鉴于高糖能够激活PKC, MAPK等信号通路,并导致血管平滑肌功能损害。同时,灯盏花素可能具有抑制PKC及MAPK的作用,我们以论述上推测灯盏花素可以改善高糖导致的血管功能损害,对糖尿病动脉粥样硬化并发症具有保护作用,其机理可能与其抑制血管平滑肌细胞PKC和MAPK的表达有关。由此我们体外培养原代大鼠血管平滑肌细胞,观察灯盏花素治疗是否能改善高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖,迁移等功能损害,同时检测PKC, MAPK等信号通路蛋白的表达水平,试图以PKC和MAPK角度探讨其对糖尿病动脉粥样硬化并发症的保护作用。灯盏花素对高糖环境下血管平滑肌细胞功能的影响及其机制探讨目的：观察灯盏花素对高糖环境下血管平滑肌细胞增殖和迁移能力的影响及其机制探讨。策略：用颈椎脱臼法处死雄性Sprague-Dawley大鼠(5-8周,150-180g),取其胸主动脉,剥除外层结缔组织和外膜,用镊子轻轻刮去内层内皮细胞,取中层用组织贴块法分离培养血管平滑肌细胞。并用差别贴壁法进一步纯化血管平滑肌细胞。4-6代细胞用于实验。实验基本分成11组：(1)正常糖浓度(5mmol/L)对照组；(2)高糖(25mmol/L)处理组；(3)正常糖浓度+甘露醇(25mmol/L);(4)高糖+DMSO组；(5)高糖+小剂量灯盏花素处理组(30mg/L,65μmol/L);(6)高糖+大剂量灯盏花素处理组(50mg/L,108μmol/L);(7)高糖+PKC抑制剂Ro-31-8220(-3μmol/L组；(8)高糖+MEK1/2抑制剂PD98059(MEK1/2是ERK1/2MAPK的上游激酶,25μmol/L);(9)正常糖浓度+灯盏花素处理组(50mg/L,108μmol/L);(10)正常糖浓度+PKC抑制剂Ro-31-8220组；(11)正常糖浓度+MEK1/2抑制剂PD98059组。处理一定时间后,采取CCK-8细胞活性检测试剂盒检测细胞增殖水平,采取划痕试验和Transwell小室检测细胞迁移水平,采取Western blot策略检测PKC-β2, p-PKC-β2, ERK1/2, p-ERK1/2, p38, p-p38, JNK和p-JNK等信号通路蛋白的表达和活性。结果：高糖能够显著推动血管平滑肌细胞增殖和迁移,并且能够显著激活PKC-β2以及ERK1/2MAPK信号通路,但是对P38和JNK的活性没有显著影响。高糖的作用不是由于高糖所致的高渗状态所致。划痕试验和transwell迁移检测结果一致表明,灯盏花素呈浓度依赖地抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞迁移,并且其溶剂DMSO对VCs活性和功能没有影响。灯盏花素还抑制了高糖激活的ERK1/2MAPK信号通路,但是对高糖激活的PKC-β2没有抑制作用。结论：我们的探讨结果表明高糖通过PKC-β2以及ERK1/2MAPK信号通路推动血管平滑肌细胞增殖和迁移。灯盏花素能抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移,可能具有抗动脉粥样硬化的作用,其作用机制可能与PKC信号通路无关,可能通过抑制ERK1/2MAPK信号通路实现的。关键词：灯盏花素论文糖尿病论文动脉粥样硬化论文血管平滑肌细胞论文增殖论文迁移论文蛋白激酶C论文丝裂原活化蛋白激酶论文
致谢5-6
中文摘要6-10
Abstract10-14
主要缩略词14-17
引言17-19
1 材料与策略19-28
2 结果28-40
3 讨论40-43
结论43-44