侧耳木霉T21植酸酶基因克隆与原核表达

摘要4-5

Abstract5-10

第一章 绪论10-18

1.1 引言10

1.2 植酸酶的种类和来源10-11

1.2.1 植酸酶的分类10-11

1.2.2 植酸酶的来源11

1.3 国内外植酸酶基因工程探讨进展11-13

1.3.1 植酸酶基因在原核微生物中的表达12

1.3.2 植酸酶基因在真核微生物中的表达12-13

1.3.3 植酸酶基因在植物中的表达13

1.3.4 植酸酶基因在动物中的表达13

1.4 木霉菌介绍13-14

1.5 木霉植酸酶探讨进展14

1.6 课题的探讨目的和作用14-17

1.7 技术路线17-18

第二章 木霉植酸酶编码基因作为系统发育标记潜力探讨18-31

2.1 实验材料18-20

2.1.1 实验菌株18-19

2.1.2 主要试剂19

2.1.3 培养基配方19-20

2.1.4 试剂配方20

2.2 实验策略20-24

2.2.1 木霉产植酸酶能力测定20

2.2.2 菌种保藏20

2.2.3 木霉总DNA提取20-21

2.2.4 木霉植酸酶基因序列的扩增21-22

2.2.5 琼脂糖凝胶电泳22

2.2.6 木霉ITS序列的扩增22

2.2.7 PCR样品的纯化(DNA琼脂糖凝胶回收)22-23

2.2.8 测序23-24

2.2.9 木霉植酸酶基因系统发育标记浅析24

2.3 结果与浅析24-29

2.3.1 木霉产植酸酶的能力24

2.3.2 木霉菌植酸酶基因扩增结果24-25

2.3.3 基于ITS序列的木霉鉴定结果25-26

2.3.4 木霉ITS变异区与植酸酶基因序列浅析及系统发育树构建26-29

2.4 讨论29-31

第三章 侧耳木霉T2-1植酸酶编码基因的克隆及原核表达31-48

3.1 实验材料31-32

3.1.1 菌株与质粒31

3.1.2 主要试剂31

3.1.3 培养基及试剂配方31-32

3.2 实验策略32-42

3.2.1 侧耳木霉T2-1植酸酶(phyAT2-1)基因克隆32-37

3.2.2 重组原核表达载体的构建转化及鉴定37-41

3.2.3 目的蛋白的原核表达41-42

3.3 实验结果42-46

3.3.1 侧耳木霉T2-1植酸酶(phyAT2-1)基因克隆42-43

3.3.2 重组原核表达载体的构建转化及鉴定43-46

3.4 讨论46-48

第四章 phyAT_(2-1)重组蛋白复性与活性测定48-57

4.1 实验材料48

4.1.1 实验试剂48

4.2 实验策略48-51

4.2.1 重组蛋白的分步透析法复性48-49

4.2.2 重组蛋白的Ni柱亲和层析复性49

4.2.3 重组蛋白植酸酶活性的测定49-50

4.2.4 重组植酸酶phyAT2-1的蛋白含量测定50

4.2.5 重组蛋白最适温度测定50-51

4.3 实验结果51-55

4.3.1 分步透析法复性重组蛋白51

4.3.2 柱上复性法复性重组蛋白51-52

4.3.3 蛋白活性测定52-55

4.4 讨论55-57

结论57-58

致谢58-59