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摘要：帕金森病（Parkinson disease，PD）是仅次于阿尔茨海默病的神经系统变性疾病。PD确切的发病机制不完全清楚，目前用左旋多巴或者多巴胺受体激动剂的多巴胺替代治疗是PD的主要治疗策略，但是这些治疗不能阻止和延缓PD的进展。相对于多巴胺替代治疗，神经保护治疗的目的是防止多巴胺能神经元的丧失。越来越多的证据表明：他汀类药物是一种神经保护剂，它们可能减少PD的风险。本课题首先探讨阿托伐他汀对PD的保护作用，进一步探讨阿托伐他汀保护作用背后的蛋白质水平的转变，发现可能参与PD发病及阿托伐他汀保护作用的蛋白质，为在蛋白质水平上探讨阿托伐他汀保护PD作用机制提供新的思路。用1--4-吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium ion，MPP~+）诱导肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）构建公认的PD细胞模型。实验分成三组：第Ⅰ组为对照组，不用MPP~+及阿托伐他汀处理PC12细胞；第Ⅱ组为损害组：用不同浓度的MPP~+作用于PC12细胞并作用不同的时间（时间剂量曲线）；第Ⅲ组为保护组：MPP~+作用于阿托伐他汀作用1h后的PC12细胞。通过噻唑蓝[3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyl tetrazopum bromide，MTT]实验来检测PC12细胞存活率，用吖啶橙（AO）/嗅化乙锭（EB）双染法观察细胞凋亡，然后根据时间剂量曲线，确定药物的最佳浓度及作用时间，进一步行蛋白质组学实验，找出差别蛋白点，通过基质辅助激光解吸/电离-飞行时间串联质谱（MALDI TOF/TOF MS）鉴定有显著差别的蛋白点。选择质谱鉴定结果中的一个蛋白，运用Western-blot实验验证质谱鉴定结果的可靠性。结果显示：MPP~+对PC12细胞的毒性作用是剂量和时间依赖性的，MPP~+显著降低了PC12细胞的活力，增加了PC12细胞的凋亡。阿托伐他汀显著地减弱了MPP~+对PC12细胞的损伤，减少了MPP~+诱导的PC12细胞的凋亡。蛋白质组学成功鉴定出其背后表达水平发生转变的4个蛋白质：3个蛋白水平（包括葡萄糖调节蛋白75、蛋白质二硫键异构酶、过氧化物酶4）在MPP~+作用PC12细胞72小时时表达上调，阿托伐他汀减弱了MPP~+诱导的蛋白水平上调；另外1个蛋白即泛醌在MPP~+作用PC12细胞72小时时表达下调，阿托伐他汀部分逆转MPP~+诱导的下调。用Western-blot成功验证了葡萄糖调节蛋白75，进一步证实了质谱鉴定结果的可靠性。本实验成功建立了PD细胞模型及阿托伐他汀保护模型。在本细胞模型中，阿托伐他汀对PD具有保护作用。本探讨在蛋白质水平上为探讨PD发病机制和他汀类药物保护作用机制提供了新的思路，本实验结果也支持他汀类药物可能用于防治PD，为保护治疗提供了论述依据。关键词：1--4-吡啶论文阿托伐他汀论文帕金森病论文PC12细胞论文蛋白质组学论文
摘要4-6
Abstract6-10
英文缩略词表10-12
第1章 绪论12-28
1.1 引言12-13
1.2 文献综述13-28
1.2.1 介绍13-14
1.2.2 他汀类药物概述14
1.2.3 α-突触核蛋白在 PD 中的作用14-15
1.2.4 胆固醇与 PD 之间的联系15-17
1.2.5 他汀类药物防治 PD 的临床探讨17-18
1.2.6 他汀类药物可改善 PD 临床症状18-19
1.2.7 他汀类药物防治 PD 的可能机制19-26
1.2.8 总结和展望26-28
第2章 帕金森病细胞模型及阿托伐他汀保护模型的建立28-44
2.1 前言28-29
2.2 材料与策略29-33
2.2.1 材料29-30
2.2.2 策略30-33
2.2.3 统计学浅析33
2.3 实验结果33-39
2.3.1 MPP~+对 PC12 细胞的毒性作用33-36
2.3.2 阿托伐他汀对 MPP~+诱导 PC12 细胞损伤的保护作用36-39
2.4 讨论39-43
2.5 小结43-44
第3章 阿托伐他汀对帕金森病细胞模型保护作用的蛋白质组学探讨44-78
3.1 前言44
3.2 材料和策略44-59
3.2.1 材料44-52
3.2.2 实验策略52-59
3.3 实验结果59-71
3.3.1 保护组与损害组蛋白质表达差别59-60
3.3.2 质谱鉴定结果60-70
3.3.3 验证质谱鉴定结果70-71
3.4 讨论71-77
3.5 小结77-78
第4章 结论78
革新点78-80